SELEX法
SELEX (Systematic Evolution of Ligands by EXponential enrichment)
法は,1990年代に確立された実験法で,in vitro selection法とも言われ,色素,アミノ酸,タンパク質に結合する核酸リガンド
(アプタマー)の実体を明らかにする方法である.リガンドとなる核酸を微量精製(選別)したうえで,PCRを用いて
指数関数的に増幅し,この過程をシステマティックに複数回繰り返すことによって,至適結合配列をもつ核酸分子を同定する.
この原理を模式的に表したのが上の図である.
当研究室では,転写因子の機能を同定するためにこのSELEX法を用いている.
また,SELEX法を改良したGenomic SELEX法を用いた解析も行っている.Genomic SELEX法は,解析に用いるさまざまな配列
パターンをもったRandom DNA poolを標的タンパク質のGenome DNAを用いて調製する方法である(下の図参照).
このGenomic SELEX法の利点としては,ノイズが少ないということ,ゲノム上の作用部位(オペレーター部位)
を同時に決められるという点が挙げられる.当研究室では,このGenomic SELEX法を用いて,いくつかの転写因子について
そのオペレーター部位を明らかにした.
References
- Structural and functional analysis of the TetR-family transcriptional regulator SCO0332 from
Streptomyces coelicolor
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- The CGL2612 protein from Corynebacterium glutamicum is a drug resistance-related transcriptional
repressor: structural and functional analysis of a newly identified transcription factor from genomic DNA
analysis
Hiroshi Itou, Ui Okada, Hiroaki Suzuki, Min Yao, Masaaki Wachi, Nobuhisa Watanabe and Isao Tanaka
J Biol Chem, 280, 38711-38719 (2005)